TLS 其中后HR，NHEJ通路专门修复 DNA 双链断裂 DSBs CRISPR被誉为“基因剪刀，上帝之手”，会让人以为，CRISPR基因编辑就是切开DNA，造成DNA缺失当然这可能是我自己个人的初步感觉，但认真复盘CRISPR基因编辑我。

最好是可以学一下SnapGene这个软件的使用方法有视频，个人认为，自行查资料理解每一个元件的含义和作用，可以帮助更快的补充背景知识通过将散落的知识点集合起来，最后拼凑成自己的；我猜你和我一样，保存的是他们上层网址，然后自己点几次才能进入sgRNA的设计界面貌似他们把网址改掉了，或是链接bug了你用下面这个链接，可以直接进入sgRNA的设计界面 亲测有效；将 CRISPRCas 系统用于其它非细菌细胞需要满足两个条件一个 Cas 酶，用于切断靶标 DNA，比如目的基因中的 DNA 片段，另外一个就是称为导向 RNA gRNA的 RNA 分子，这种分子能通过互补结合靶标gRNA 也就是细菌细。

CRISPR设计工具提供了所需的所有寡核苷酸和引物的序列i制备sgRNA结构，ii分析目标修饰效率，iii评估潜在靶外位点的切割值得注意的是，由于表达sgRNA的U6 RNA聚合酶III启动子更倾向于将鸟嘌呤G核苷酸作为其转录本的；我对之前的所有教程进行了再次详细的总结 CRISPRCas9基因编辑之背景介绍及gRNA设计上在上一次文章中，我们已经得到了在线工具设计的sgRNA序列，经由简单评估后选择出合适的sgRNA 以上一次文章查到的PTEN knockout cell l。