这种修复机制主要用于CRISPR Cas9系统介导的基因敲入在该修复路径中，需要将一段与预期编辑位点上下游紧邻序列具有高度同源性的DNA修复模板特异的gRNA和Cas9核酸酶一起引入细胞中在高度同源性DNA模板存在的情况下， HDR机制。

Clustered regularly interspaced short palindromic repeatsCRISPR规律成簇的间隔短回文重复和CRISPRassociated protein 9Cas9，共同组成了一套系统，是细菌用来防御噬菌体DNA注入和质粒转移的天然防御系统但现在被人类。

CRISPRCas9三sgRNA设计好之后 对前期文章的补充 设计sgRNA之后，需要对结果进行判断提交订单，等待引物到达 华大基因的速度非常快，大约在23个工作日即可拿到，在等待期间需要准备好感谢师兄DZ。

一 CRISPR Cas9起源 CRISPRCas9系统最初在细菌和古细菌中被发现，是一种细菌应对外来病毒或质粒不断攻击而演化来的获得性免疫防御机制当外源DNA首次侵入细菌时，外源DNA被Cas核酸酶切割，并以间隔序列形式整合到CRISPR基因座。

最近要开始学习CRISPRCas9实验，对着动辄几十页的说明，实在是看不下去，不如就尝试用读书笔记的方式来学习吧 今日要讲的当然是张峰老师组的protocol 文章结构简单整理如下11 Targeted nucleases are powerful tools。

通过加入同源序列，构建好质粒就可以啦 具体可以参见张CRISPRCas9 Knockin Mice for Genome Editing and Cancer Modeling里面有详细的说明，不懂可以看文章的补充材料。

大家都知道CRISPRCas9有脱靶效应，并且每个sgRNA的效率都不一样的，因此在做正式实验之前，我们要验证sgRNA的效率，之后优中选优还是那句话，同样的目的有很多不同的方案，我了解到的有欢迎大家补充，互相交流，提供更。

敲除在外显子上设计gRNA引导cas9切割，造成双链断裂，当缺失的碱基数为3的倍数，修复后可发生移码突变 敲入gRNA和cas9复合物造成靶位点DNA双链断裂后，细胞以外源携带敲入片段的DONOR作为模板进行同源重组修复HDR，将。